產(chǎn)品描述

本試劑盒包含創(chuàng)新性的 Exosome Tracker，一種專用于外泌體熒光標(biāo)記的示蹤染料探針。Exosome Tracker 的標(biāo)記效率高于其他探針，采用共價(jià)方式嵌入胞外囊泡的雙層膜結(jié)構(gòu)，優(yōu)于親脂或疏水性染料，避免自組裝納米粒子引起的信號(hào)干擾，從而提升標(biāo)記效率。Exosome Tracker可簡單有效的進(jìn)行體外外泌體的跟蹤和監(jiān)測，因其具有較長的體內(nèi)半衰期，標(biāo)記后的外泌體可用于動(dòng)物體內(nèi)示蹤實(shí)驗(yàn)。其激發(fā)光波長為 580 nm，發(fā)射光波長為 664 nm。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。

使用方法

自備試劑與耗材：DAPI、PBS(新鮮配制，無菌)、共聚焦專用平皿、緩沖液置換試劑盒或其他緩沖液置換產(chǎn)品。

1.    試劑準(zhǔn)備

Exosome Tracker 使用前需從 -20℃ 取出，避光解凍備用。注：Exosome Tracker 為 200×濃度，收到后建議分裝避光保存于 -20℃。

2.    標(biāo)記

(1)  標(biāo)記外泌體：按 1:200 (v/v) 比例將 Exosome Tracker添加到外泌體溶液中，37℃避光孵育1 h，輕輕上下顛倒以確保染色均勻。

(2)  去除游離Exosome Tracker：加入 0.1倍體積的 Exosome Tracker Remover，室溫避光孵育10 min以中和多余探針，再用緩沖液置換試劑盒將溶液置換為 PBS，以去除游離的 Exosome Tracker，獲得純凈的熒光標(biāo)記外泌體。注：根據(jù)樣本體積選擇合適的緩沖液置換產(chǎn)品：S-緩沖液置換試劑盒 (貨號(hào): AC25L491) 適用于100-180 μL；M-緩沖液置換試劑盒 (貨號(hào): AC25L492) 適用于 0.2-0.5 mL；L-緩沖液置換試劑盒 (貨號(hào): AC25L493) 適用于1-2.5 mL。

3.    示蹤

對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

(1)  接種細(xì)胞：按合適的密度將細(xì)胞接種在共聚焦專用平皿中培養(yǎng)。

(2)  孵育外泌體：當(dāng)細(xì)胞生長至70%時(shí)，加入熒光標(biāo)記的外泌體，在細(xì)胞培養(yǎng)條件下避光孵育。注：根據(jù)細(xì)胞類型和外泌體來源確定具體孵育時(shí)間，通常為2h，可調(diào)整范圍為2-4h。

(3)  清洗與染色：取出平皿，用 PBS 清洗3次，加入DAPI溶液，室溫避光孵育10min，再用PBS清洗3次。若直接檢測可跳過固定步驟，否則用4%多聚甲醛固定細(xì)胞。

(4)  熒光檢測：在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞和外泌體，拍照記錄。

對于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

(1)  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備：例如選擇 6-8 周齡小鼠或其他適齡動(dòng)物模型，每周給予兩次一定劑量的外泌體。

(2)  外泌體給藥：根據(jù)預(yù)設(shè)的外泌體劑量、給藥方式和頻次，將 Exosome Tracker 標(biāo)記的外泌體注入動(dòng)物體內(nèi)。

(3)  檢測：外泌體給藥后，通常在 6-8 周后進(jìn)行活體發(fā)光成像或其他熒光檢測。

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2． 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3． 熒光染料均存在淬滅問題，操作過程中請注意避光，以減緩熒光淬滅

4． 本品需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)條件以及應(yīng)用方向來摸索最佳的工作濃度及染色時(shí)間。

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